关键词：对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯；高效液相色谱；替诺福韦；废水
替诺福韦（PMPA）及其前药替诺福韦酯属于开 环膦酸核苷类抗病毒药物，具有非常好的抗 DNA 病 毒和逆转录病毒感染的作用，被广泛用作临床治 疗艾滋病毒（HIV），乙肝病毒（HBV），疱疹病毒（HSV） 等感染的药物。对甲苯磺酰氧甲基膦酸二乙酯 （DESMP）是合成替诺福韦的关键中间体，同时也 是杀菌剂、除草剂及汽车装饰材料高光黑膜的重要生产原料。
DESMP 工业化生产多采用两步法，首先，以亚 磷酸二乙酯和甲醛或多聚甲醛在一定温度下反应制备羟甲基膦酸二乙酯，再以羟甲基膦酸二乙酯和对 甲苯磺酰氯为原料，碱为缚酸剂催化反应，经萃取、 水洗、蒸馏回收溶剂制备而成。在萃取、水洗过程中，会产生一定量的碱性废水，这给后期环保处理带 来巨大压力。对工业废水处理，通常以测定废水中CODCr 值来反映有机物污染物含量，这并不能有效反映废水中实际有机物的种类及含量，无法做到针对性处理。因此，有必要建立水洗过程废水中DESMP 的分析方法，为开发合理的废水处理工艺提供参考依据。 已有关于 DESMP 的报道多集中于合成工艺的探讨，亦有关于替诺福韦的液相色谱分析方法研究，但不适合碱性废水中 DESMP 含量的测定。 本研究采用高效液相色谱法测定反应工艺水洗废水中 DESMP 的含量，为进一步控制废水排放，寻求合 理的废水减量化、资源化处理方法提供必要的检测 手段。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
LC-100 型液相色谱仪、紫外检测器、LC-100 型数据处理系统，上海伍丰科学仪器有限公司；AUX120型分析天平（日本岛津公司）；AS5150A 型超声波振 荡器（天津奥特塞斯仪器有限公司）；Molresearch 超 纯水仪（重庆摩尔水处理设备有限公司）。 标准储备液 天平精密称取 DESMP 标准品0.1552g，用 50mL 甲醇溶解，流动相转移至 500mL的容量瓶中，超声振荡脱气 5min，流动相稀释至刻 度，混匀，配制 DESMP 浓度为 310.40mg·L-1 标准储 备液，4℃冰箱保存。
DESMP 碱性水洗废水 2021 年 5 月采集于某化 工厂，聚四氟乙烯塑料采样瓶密封，4℃冰箱保存。 H3PO（4 AR 南京化学试剂股份有限公司）；甲醇 （HPLC 天津永大化学试剂有限公司）；DESMP（AR贝斯特试剂成都点纯科技有限公司）；试验用水为超 纯水。
1.2 色谱条件
液相色谱柱：VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）；柱 温：30℃；定量环进样 20μL；流动相为含 0.1%（V/V） H3PO4 水溶液（流动相 A）和甲醇（流动相 B）的混合 液，流动相A∶流动相 B=50∶50，等度洗脱；色谱柱流量：1.0mL·min-1；LC-100 紫外-可见检测器，检测波 长 230nm。以色谱峰保留时间定性，采用外标法峰面 积定量。
1.3 试验方法
将待测试样品摇匀，准确吸取 0.50mL 试验样品 于 100mL 容量瓶中，用 50%流动相 A 与 50%流动 相 B 的混合液溶解，超声波振荡器脱气 5min，稀释至刻度线，混匀。色谱进样前，用 0.45μm 微孔滤膜 过滤，滤液按仪器工作条件分析。
2 结果与讨论
2.1 流动相选择
DESMP 分子结构中有亲水官能团磺酰氧甲基 膦酸二乙酯基和疏水官能团对甲基苯基。对甲基苯是弱极性疏水性基团，与非极性色谱填料 C18 有强 相互作用，流动相极性减小可使其保留时间减小。对于甲醇-水组成的二元流动相体系，随着水含量的增加，流动相极性增加，DESMP 与 C18 固定相的相互作用增强，保留时间延长。 对比不同 H3PO（4 0.1%）水溶液（流动相 A）/甲醇 （流动相 B）混合液作流动相时，等度洗脱 DESMP 在 C18 柱上的色谱保留行为，色谱分离数据见表 1。
流动相 A/流动相 B（V/V）= 20/80 时，DESMP 的保留时间短，与相邻物质的分离度仅为 1.10，小于1.5，DESMP 与相邻物质无法分离；流动相 A/流动相 B（V/V）=40/60 时分离度为 2.40，已经基本实现完全分离；随着流动相中甲醇含量减少，DESMP 在 C18 柱 上的保留时间增加，与相邻干扰物质的分离度增加，流动相 A/流动相 B=50/50（V/V） 时分离度为 7.85，DESMP 保留时间为 13.208min，在此流动相组成条件下 DESMP 与干扰物质可以实现基线分离，考虑到废水组分的复杂性，最终选择 H3PO（4 0.1%）水溶 液/甲醇为 50/50（V/V）为流动相，等度洗脱。在此流动 相组成条件下，DESMP 样品分离色谱图见图 1，DESMP 保留时间 13.208min，色谱柱效 n=8270，与 相邻干扰物质分离度为 7.85，可完全分离。
2.2 检测波长选择
采用 LC-100 紫外检测器对 DESMP 在 200～300nm 波长范围内进行紫外光谱扫描，紫外吸收光 谱见图 2。
由图 2 可知，DESMP 在 210～300nm 波长范围内有两个宽带吸收，210～240nm 有强的吸收谱带，摩尔吸光系数大，灵敏度高；250～280nm 处有弱吸收谱 带，摩尔吸光系数小。DESMP 分子中磺酰氧基与苯 环存在共轭，使分子中苯环 E2 带吸收发生红移，最 大吸收波长为 230nm。E2 谱带摩尔吸光系数较大， 灵敏度相对较高，因此，试验选择 230nm 作为方法 检测波长。
2.3 标准曲线与最小检测浓度
分别准确移取 0.20、0.40、1.00、2.00、4.00、8.00mL标准储备液，置于 50mL 容量瓶中，用 50%流动相 A 与 50%流动相 B 的混合液稀释至刻度，混匀，配制 6 个浓度梯度的标准溶液，DESMP 的浓度分别为 1.24、2.48、6.21、12.42、24.83、49.66mg·L-1。按仪器工作条 件进行色谱分析，以浓度 C（mg·L-1）横坐标，峰面积 A（mAU·s）为纵坐标绘制标准曲线，见图 3。
由图 3 可知，DESMP 标准曲线回归方程 A=47.186 ×C+13.711，相关系数 r =0.9999，在 1.24 ～49.66mg·L-1 浓度范围内线性关系良好。以浓度1.24mg·L-1 DESMP 标准溶液测定方法最小检测浓度 Cmin，在液相色谱条件下进样 20μL，测得 DESMP 色谱峰高 2.53×10-3AU，仪器短期基线噪声 7.0×10-6AU， 按《GB/T 26792-2019 高效液相色谱仪》规定方法计 算，方法最小检测浓度 Cmin=6.86×10-3mg·L-1。
2.4 精密度试验
平行移取 0.50mL 试样 6 份，按照试验方法进行 样本处理，外标法定量分析，测试数据及定量分析结 果见表 2。
2.5 回收率试验
精密移取已知 DESMP 含量的试验样品 0.50mL于 100mL 容量瓶中，再分别加入 DESMP 储备液 0.50，2.00，8.00mL，流动相稀释至刻度，混匀，进行低、中、 高 3 种浓度水平的加标试验，每个浓度水平的样品 进行 6 次平行测定，计算平均加标回收率和测定结 果的相对标准偏差（RSD），结果见表 3。
由表 3 可知，DESMP 加标回收率为 98.85%～101.59%，RSD 为 1.14%～2.46%。
2.6 样品测定
对某企业生产 DESMP 工艺废水进行 6 批次采样，按照试验方法进行测定，废水中 DESMP 含量在320～810mg·L-1 范围内变化，说明企业工艺生产基本 稳定。分析方法的建立为 DESMP 工艺条件优化及废水处理工艺研究提供了参考依据，同时也为企业产品质量控制提供了可靠保障。
3 结论
本工作建立了替诺福韦生产工艺废水中 DESMP含量测定的高效液相色谱法。方法具有简单、快速、 重复性好的优点，方法的线性范围宽，检出限低，重 现性和准确度均能满足废水中 DESMP 含量的测 定，测试方法亦可以用于生产工艺条件的优化。
原标题：高效液相色谱法测定 替诺福韦工艺废水中 DESMP 含量
原作者：于 洋，刘治中，王建刚
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